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新生鼠神經元的原代細胞培養
發布時間:2018-11-16 14:33:11| 瀏覽次數:

    準備工作:

    解剖器械需提前滅菌,烤干;Neuralbasal培養;D-PBS緩沖液;0.25%trypsin/0.02%EDTA消化液;0.05%poly-lysin。12孔板。

     

    實驗步驟:

    1. 海馬組織分離:準備培養皿2個,分別加入冰凍D-Hank’s液約5ml,至于冰盤上;

    2. 1-3天鼠,75%酒精浸泡片刻后,用大剪子斷頭處死。

    3. 取出完整腦至盛有預冷D-PBS的培養皿中,最后用彎頭顯微鑷由海馬游離端仔細分離海馬組織,并剔除血管及腦膜。

    4. 將組織塊用彎頭眼科剪剪碎,每小塊約2mm3左右,用槍移入5mlEP中,稍為沉淀1分鐘,吸棄上清,加入0.25%trypsin/0.02%EDTA,37℃消化10-15分鐘左右。

    5. 機械吹打分散細胞,40μm篩網過濾,制成單細胞懸液,1000rpm室溫離心6min,棄去上清液,加Starting medium,尖嘴吸管吹打分散細胞后,制成4×105個/ml的單細胞懸液,接種在培養板內。

    6. 2小時后補培養基0.5ml每孔。

    7. 接種72h后,加入含10μM阿糖胞苷的Culture Medium作用48h,以抑制膠質細胞的過度增殖。之后每隔兩天用Culture Medium換液。


 
 
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