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Western-Blot 常見問題與經驗(二)
發布時間:2018-11-26 11:36:13| 瀏覽次數:

    1. 當目的蛋白質分子量很小(10KD)時western blot的方法?

    經驗:縮短轉移的時間,使用0.2μm的膜或者兩層膜疊加再進行轉膜。

     

    2. 蛋白只停留在膠上,轉移不到膜上是怎么回事?

    經驗:轉移時間過短;樣本濃度過低。

     

    3. 為什么︶ 條帶呈笑臉狀?

    經驗:電泳系統溫度偏高、凝膠不均勻冷卻,中間冷卻不好。

     

    4. 為什么︵ 條帶呈皺眉狀

    經驗:凝膠或玻璃擋板底部有氣泡、兩邊聚合不完全。

     

    5. 多少細胞提的蛋白夠做western blot

    經驗:通常在5×106就可以。

     

    6. 如果上樣量超載,要用什么方法來增加上樣量?

    經驗:超載30%是不會有問題、通過對樣本進行濃縮,或者透析掉一部分小分子蛋白。還有可以考慮加大膠的厚度,使用1.5mm的。


 
 
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