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雙重免疫熒光免疫組織化學染色
發布時間:2019-03-30 11:31:59| 瀏覽次數:
TAG: 免疫熒光 免疫組化 染色

    關鍵詞:免疫熒光;免疫組化;染色

    對腦惡性膠質瘤病理組織蠟塊標本采用免疫熒光直接法在石蠟組織切片上進行CD133和Nestin單、雙重標記,觀察組織切片上CD133和Nestin的表達情況。其方法步驟如下:

    石蠟切片3um厚度; 把切片置60℃ 漂烘儀烘烤過夜; 用二甲苯脫蠟3次,每次 5分鐘; 逐級放入100%酒精,95%酒精,80%酒精,70%酒精中各5分鐘; 蒸餾水沖洗2次,每次5分鐘; 胰蛋白酶消化置37℃恒溫箱放置40分鐘; 用PBS液沖洗3次,每次5分鐘,之后進入暗室內操作; 在暗室內加熒光素標記巢蛋白/神經上皮干細胞蛋白抗體IgG(KTB2063Anti-Nestin/FITC)和紅 色熒光素羅丹明(RBITC)標記 CD133 抗體G(CD133/RBITC)各按1:20比例離心3000轉/分鐘震蕩混合后滴加抗體,加蓋玻片,4℃過夜;PBS沖洗5次、每次5分鐘; 滴加6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)按1:1000比例復染細胞核,加蓋玻片; 熒光顯微鏡下觀察。


 
 
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