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免疫組化染色的新方法
發布時間:2019-03-30 11:32:32| 瀏覽次數:
TAG: 免疫組化 染色

    關鍵詞:免疫組化;染色

    采用免疫組織化學MaxVisionTM2法,用PBS液代替一抗作為陰性對照,而陽性對照為BMP2/7陽性的小鼠的氣管透明軟骨切片標本,操作步驟如下:

    2.4.1石蠟切片經由二甲苯脫蠟后,采用梯度酒精水化處理。

    2.4.2 蒸餾水沖洗后,用0.01M,PH=7.4的PBS浸泡5分鐘。

    2.4.3 抗原修復,將切片置入0.01mmol/L,PH6.0檸檬酸緩沖液中,在不銹鋼壓力鍋中高溫高壓修復2分鐘,置于室溫下冷卻后用0.01M,PH=7.4的PBS浸泡5分鐘。

    2.4.4 用3%的H2O2-甲醇溶液常溫下孵育10分鐘,以此消除內源性過氧化物酶的活性,然后再用0.01M,PH=7.4的PBS沖洗,3分鐘×3次。

    2.4.5 除去PBS液后,每張切片滴加50ul(1滴)即用型兔抗人BMP2多克隆抗體工作液,或滴加50ul(1滴)即用型兔抗人BMP2多克隆抗體工作液,室溫下孵育1小時。

    2.4.6 用0.01M,PH=7.4的PBS沖洗切片,3分鐘×3次。

    2.4.7 除去PBS液,每張切片滴加50ul(1滴)即用型MaxVisionTM2試劑,置于室溫下孵育30分鐘。

    2.4.8 用0.01M,PH=7.4的PBS沖洗切片,3分鐘×3次。

    2.4.9 除去PBS液后,每張切片滴加100 ul(2滴)配置好的DAB顯色劑,于顯微鏡下觀察3-5分鐘,根據顏色的發展情況掌握染色時間。

    2.4.10 自來水充分沖洗切片,蘇木素復染,再用自來水沖洗返藍,梯度酒精脫水干燥,二甲苯透明,中性樹膠封片。


 
 
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