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高糖對人視網膜色素上皮細胞神經鈣黏連蛋白和纖維連接蛋白表達的影響
發布時間:2019-04-10 14:00:47| 瀏覽次數:
TAG: 人視網膜色素上皮細胞 高糖 上皮間質轉化 神經鈣黏連蛋白 纖維連接蛋白


       摘要:目的:體外建立高糖培養人視網膜色素上皮(hRPE)細胞模型,觀察高糖條件下RPE細胞神經鈣黏連蛋白(N-cadherin)和纖維連接蛋白(fibronectin)的表達變化,探討高糖對RPE細胞發生上皮間質轉化(EMT)的影響。方法:體外培養hRPE細胞,以60mmol/L的葡萄糖建立高糖模型,實驗分對照組(5.5mmol/L的葡萄糖)和高糖24,48,72h組,用免疫組織化學法及Real-timePCR技術檢測各組RPE細胞N-cadherin和fibronectin的表達。結果:高糖組RPE細胞出現排列紊亂,胞體變長變大,高糖72h組最明顯。免疫組織化學法檢測結果顯示:與對照組相比,高糖組RPE細胞N-cadherin表達呈下降趨勢;而fibronectin表達出現并呈升高趨勢。Real-timePCR檢測結果顯示:與對照組相比,高糖組RPE細胞N-cadherinmRNA表達水平在24h時出現下降,72h時降低最明顯(F=12.252,P=0.000),24h組與對照組相比差異無統計學意義,48h及72h組分別與對照組相比差異有統計學意義(P<0.05);與對照組相比,高糖組RPE細胞fibronectinmRNA表達水平在24h時出現升高,72h時升高最明顯(F=50.543,P=0.000),24h組與對照組相比差異無統計學意義,48h及72h組fibronectinmRNA表達水平明顯升高,分別與對照組相比差異有統計學意義(P=0.000,P=0.000)。結論:高糖條件下RPE細胞上皮標記物N-cadherin表達下調,間質標記物fibronectin表達出現,發生EMT改變,這一現象為探討增生性糖尿病視網膜病變的發病機制及其防治提供新的思路。
       
       關鍵詞:人視網膜色素上皮細胞;高糖;上皮間質轉化;神經鈣黏連蛋白;纖維連接蛋白
       
       
       3討論
       DR的發病機制目前未完全明確,持續的缺氧和高糖狀態可造成RPE細胞不同程度的損傷,是導致DR的發生發展重要因素[5]。RPE細胞是一種單層矮柱狀上皮細胞,細胞之間依靠緊密連接規則排列構成血-視網膜屏障,在脈絡膜和視網膜細胞之間營養、水、電解質等物質的轉運中起關鍵作用。RPE細胞可以轉運大量葡萄糖為視網膜神經感覺層提供能量,因而更易受到血糖波動的影響[6]。由于體液環境復雜,不能明確影響因素為高糖,故我們在體外培養條件下,單純應用高濃度葡萄糖作為刺激因素,發現高糖作用hRPE細胞72h后,細胞比對照組更密集,胞體變長變大,說明高糖在一定時間內促進hRPE細胞的增生。體外培養時25~30mmol/L的高糖濃度,可近似地等同于糖尿病時體內高糖狀態[7]。韓小霞等[8]體外實驗結果顯示,30mmol/L的葡萄糖作用于hRPE,其生長曲線與正常葡萄糖濃度條件下的細胞生長曲線沒有明顯統計學差異,其考慮由于RPE細胞轉運葡萄糖的作用,其承受高糖的能力較強,單純30mmol/L的高糖不足以對其生理功能造成影響。我們在預實驗中采用30,60,90mmol/L的高糖濃度體外培養hRPE24,48,72h,發現60mmol/L的高糖濃度對hRPE的影響最明顯。故本實驗選用60mmol/L的葡萄糖濃度模擬體內絕對高糖環境。
       EMT是一種基本的病理生理現象,參與胚胎發育、腫瘤轉移和器官纖維化等過程,以上皮細胞表型的缺失及間質特性的獲得為重要特征,主要表現為具有極性的上皮細胞轉化成具有活動能力、能夠在細胞基質間自由遷移的間質細胞。越來越多的證據表明EMT在多種眼部疾病(角膜損傷后瘢痕修復[9]、后發性白內障[10]、視網膜新生血管性病變[11]等)中扮演著重要角色。近年來,RPE細胞發生EMT改變參與視網膜增生前膜形成的機制逐漸被人們發現[12,13]。
 
 
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