關鍵詞:電泳檢測;RNA的質量

     

    1、制備1%瓊脂糖凝膠:用電子天平稱取1g瓊脂糖后放入一干凈燒瓶中,吸取2ml的50×TAE稀釋成100ml電泳液,加入燒瓶中與瓊脂糖充分混勻,放置微波爐中加熱至沸騰,待瓊脂糖完全溶解變澄清透明后取出,自然冷卻至50-60℃時倒入已插好齒梳的制膠盤中,厚度約為3-5mm,置室溫下冷卻,待凝膠凝固后拔出齒梳,放入電泳槽中。

    2、吸取4ml的50×TAE稀釋成200ml電泳液,緩慢倒入電泳槽中,以沒過凝膠2mm左右為宜,可輕輕搖動瓊脂糖凝膠托盤,使凝膠下及加樣孔中的氣泡溢出。

    3、取2ul RNA和1ul Loading Buffer充分混勻后,加至加樣孔內,開啟電泳槽電源,設置電壓100V,時間15min。

    4、電泳結束后取出凝膠,放入裝有溴化乙錠(EB)溶液的容器中顯色,振蕩浸泡約15min。

    5、將凝膠置入凝膠成像系統中成像分析,以檢查RNA質量,一般可觀察到三條帶,上面兩條帶最亮,分別代表28S和18S rRNA,第一條帶(28S)亮度應為第二條帶(18S)的兩倍左右,最下面一條帶最淡,為5S rRNA,說明RNA的完整性較好,若最下面一條帶很亮而上面兩條帶很淡甚至消失,那說明RNA發生了嚴重的降解,此時必須重新提取RNA。