關鍵詞:腎臟;組織;蛋白提取

     

    8.1.1 物品準備:凍存的腎臟組織、RIPA(強)裂解液、cocktail、蛋白磷酸酶抑制劑、眼科鑷、精密天平、研缽,碾磨棒、液氮、保溫桶、錫紙、1.5ml EP管、移液器、超聲破碎儀、臺式低溫離心機、冰盒

    8.1.2 蛋白裂解液配制:cocktail/蛋白磷酸酶抑制劑:RIPA裂解液=1:100

    8.1.3 腎臟組織裂解步驟

    (1)將裝有腎臟組織的凍存管全部放在裝有液氮的保溫桶里;

    (2)用眼科鑷從凍存管中將包裹組織的錫紙夾出。迅速稱量腎臟組織的質量;

    (3)快速將腎臟組織用新的錫紙包好并對折兩次,放入研缽中;

    (4)向研缽中加入少量液氮(以剛好沒過錫紙為宜);

    (5)使用研磨棒垂直捶打組織數次,注意不能旋轉研磨錫紙(可重復第4-5步1-2次);

    (6)將研磨成粉末的組織迅速轉移至冰上的1.5ml EP管里;

    (7)將配制好的蛋白裂解液按10ml/mg的比例加入EP管中;

    (8)待全部組織按上述步驟完成后,使用超聲破碎儀將組織超聲1-2次(超3S,停5S,一次共9s);

    (9)冰上靜置半小時以充分裂解;

    (10)將上述EP管放入已預冷至4℃的離心機中,12000g離心15min

    (11)分別吸取上清至另一標記好的EP管中。