關鍵詞:曝光;PVDF膜

    1)將膜稍微瀝干液體后,平鋪于干凈的洗盒中,將ECL化學發光劑A液和B液各取1ml混勻后,用移液器吸取后均勻淋在PVDF膜表面,使其室溫充分反應(約5min);

    2)將曝光暗盒的上下塑料膜用脫脂棉球清洗并擦干后,用眼科鑷夾取PVDF膜轉移至曝光暗盒下塑料膜上,蓋上上塑料膜,并用脫脂棉球趕走PVDF膜和上塑料膜之間的氣泡;

    3)在曝光暗室內,打開紅外燈,將3-6張膠片比齊后緊貼上塑料膜,立即關好曝光暗盒。根據目的蛋白的熒光亮度決定曝光時間(5-30min);

    4)分別將顯影液、定影液倒入不銹鋼盤中,開曝光暗盒,立即取出膠片放入顯影液中,待所有條帶都顯現出黑色條帶時(1-5min),將膠片用自來水清洗后,再放至定影液中(1-5min),當膠片順著紅外燈背景比較透明時定影可以結束,將膠片在自來水下沖洗干凈,回收顯影液和定影液;

    5)將膠片放65℃烤箱中烤干,然后比對曝光暗盒中熒光標記條帶的位置,在膠片上標記膜上蛋白質Maker;

    6)掃描膠片,保存圖片和膠片,Image J 軟件分析結果。

     

    6)PVDF膜的重復使用

    1)曝光完畢后,將PVDF膜用眼科鑷夾取出,用0.5‰TBST快速沖洗一遍,然后在0.5‰TBST中放水平搖床上洗5min,倒入適量一抗二抗洗脫液搖床上洗15-30min;

    2)回收一抗二抗洗脫液(最多兩次),0.5‰TBST快速洗膜一遍,然后0.5‰TBST洗膜5min*3;

    3)此時可重新用5%脫脂牛奶封閉1h,重新孵育之前的一抗或者另外的一抗,其余步驟同前。