關鍵詞:一抗;二抗;孵育

     

    1)用一抗稀釋液按合適比例稀釋一抗,4℃長期保存;

    2)轉膜結束后,打開轉膜夾用眼科鑷夾出PVDF膜,PVDF膜用0.5‰TBST稍稍漂洗后,放入裝有5%脫脂牛奶的盒中室溫封閉1h;

    3)用0.5‰TBST將膜表面的牛奶封閉液沖洗掉,用圓珠筆在膜兩邊標記上蛋白Marker的分子量,然后根據目的蛋白分子量大小用刀片裁剪PVDF膜,孵育對應已稀釋好的一抗工作液(將膜放入裝有一抗工作液的15ml離心管),4℃搖床過夜孵育(約16-19小時);

    4)次日,取出PVDF膜,一抗回收放4℃冰箱重復使用;

    5)膜放入裝有0.5‰TBST的洗盒中水平搖床洗5min*6(每次更換新的0.5‰TBST);

    6)用0.5‰TBST 將辣根酶標記的山羊抗兔/小鼠二抗按1:5000的比例稀釋,將膜放入其中,室溫孵育1小時;

    7)0.5‰TBST洗5min*6。